血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案

簡介

本方法使用創新型分體式HMR凈化管/96孔板結合96孔正壓固相萃取裝置一步式凈化血清樣品，再通過LC-MS/MS進行檢測，回收率達90%左右。樣品處理過程簡單，結果準確。

方法優勢

Ø                      蛋白沉淀和磷脂去除一步完成，可有效去除血清中蛋白、磷脂類化合物對實驗結果的影響

Ø                      通過式凈化，極大簡化前處理步驟，約1h即可完成前處理操作

Ø                      上樣量僅需50μL，大大節省了寶貴的樣品

Ø                      試劑耗材使用量更少，更加環保節約

Ø                      柱效遠超直通式SPE，回收率穩定，可達90％左右

配套設備及耗材

樣品前處理

儀器條件

1）色譜條件

色譜柱：Leosil C18/PFP核殼柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）

流動相：5mmol/L乙酸銨甲醇（A），5mmol/L乙酸銨水溶液（B）

流速：0.4mL/min

柱溫：50℃

進樣量：2μL

流動相梯度表

2）質譜條件

AB 6500+質譜檢測器采用多反應檢測模式（Multiple

Reaction Monitoring，MRM），ESI負離子模式。

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：負離子掃描；

檢測方式：多反應離子監測（MRM）；

電噴霧電壓：-4500V；

離子源溫度：400℃；

輔助氣1：60psi；

輔助氣2：60psi；

氣簾氣：30psi；

碰撞氣體：Medium

目標PFASs的離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數見下表

方法定量限

在以下兩種方法中取最大值作為本項目的方法定量限（Limit of quantification，LOQ）：（1）在實際血清基質中滿足信噪比大于10的最低濃度，信噪比采用RMS（Root Mean Square，RMS）方法；（2）標準曲線工作范圍內滿足實測濃度在理論值偏差±20％之內的最低濃度。由于本研究中樣品未經濃縮和稀釋，無稀釋倍數，因此方法定量限即為LOQ，如下表。

16種PFASs的定量限

回收率和精密度

血清中16種全氟化合物不同水平加標回收率和精密度（n=6）

實驗注意事項

1、內標體積太小（50、20微升），稍微有損失，就會影響定量，所以建議先加樣品、再加內標，最后加乙腈；

2、加液體過程中，一定注意盡量讓移液槍的槍頭接近凈化管中最上層篩板加液。需要正確使用移液槍，特別是小體積加樣時；

3、建議分兩次加入乙腈。如果只加一次乙腈，可能洗脫不完全，凈化管里有殘留。壓完一次，加入乙腈，再正壓；

4、乙腈：血清的比例從3：1開始優化；

5、其他項目根據化合物的性質選擇甲醇或乙腈作為提取溶劑。