耗材專區 | 應用EZsep™HLB固相萃取柱建立化妝品中丙酸氯倍他索的檢測方法

前言

丙酸氯倍他索是一種抗炎皮質類固醇，屬于糖皮質激素中的一種，具有較強的抗炎、抗瘙癢和毛細管收縮作用，因此很多三無化妝品可能會違規添加糖皮質激素，使用初期由于強大的抗炎功能，使皮膚呈現出一種光滑潔白吹彈可破的狀態，但長時間使用，就開始出現紅血絲、爆痘，皮膚敏感等問題，繼續使用會使皮膚情況越來越糟糕，停用皮膚情況更糟糕，最終只能求醫慢慢來調整。

本文參照《GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質激素的測定》，利用EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12602）對化妝品樣品進行凈化，再通過高效液相色譜串聯質譜儀進行檢測，建立了化妝品中丙酸氯倍他索的檢測方法，此方法的回收率及平行性良好，適合化妝品中丙酸氯倍他索的檢測。

1、實驗過程

1.1 儀器與試劑  

SPE1000 全自動固相萃取系統，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

4500質譜系統，SCIEX公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12602），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

離心機，H1850，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.2 工作液配制

丙酸氯倍他索標準儲備液：100ug/mL，溶劑為甲醇，購自壇墨質檢標準物質中心；

丙酸氯倍他索標準工作液：取100μL的標準儲備液于10mL的容量瓶中，用40%乙腈水溶液定容，得到濃度為1.0μg/mL的標樣工作液；

移取1.0μg/mL的苯并（a）芘標準工作液0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mL，分別置于1mL容量瓶中，用40%乙腈水溶液定容至刻度，得到濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mL的標準曲線。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

準確稱取化妝品樣品0.2g（精確至0.01g）于15mL塑料離心管中，加入3mL飽和氯化鈉溶液，渦旋混勻使樣品分散，準確加入2mL乙腈，充分渦旋提取2min，5000r/min離心10min，吸出上層清液于50mL離心管中，下層氯化鈉溶液用2mL乙腈重復提取1次，合并2次乙腈提取液，在提取液中準確加入40mL高純水，混勻，加入亞鐵氰化鉀溶液0.2mL，混勻，加入乙酸鋅溶液0.2mL，混勻，5000r/min離心10min，轉移出上清液待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化

EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12602）依次用5mL甲醇、10mL水活化，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結束后用6mL10%乙腈水溶液淋洗萃取柱，再用4mL甲醇洗脫萃取柱，收集全部洗脫液，然后于E.T.氮吹濃縮儀（貨號：C020017）40℃下氮氣吹干，準確吸取4mL水渦旋復溶0.5min，過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測方式：多反應監測（MRM）；

流動相：A:0.1%乙酸水，B:0.1%乙酸乙腈（梯度洗脫程序見表1）；

流速：0.3mL/min；

進樣量：1μL。

表1 梯度洗脫程序

2、實驗結果

2.1 加標回收率結果

表2 加標回收率結果

2.2 加液色譜圖

圖1 標液色譜圖

2.3 加標樣品色譜圖

圖2 加標樣品色譜圖

3、結論

本次實驗展示了使用EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12602）對化妝品中丙酸氯倍他索進行凈化，通過高效液相色譜串聯質譜儀進行測定，該方法的加標回收率在77.8%~83.3%之間，RSD為2.6%，能夠滿足標準要求。說明EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號：PZ12602）能很好的完成方法中的凈化工作，并且結果穩定、可靠。

4、參考文獻

《GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質激素的測定》